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豬口蹄疫病毒亞洲I型抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）

說明書

【產品名稱】

通用名稱：豬口蹄疫病毒亞洲I型抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：Porcine Foot-and-Mouth Disease Virus Asia I Antibody Test Kit (ELISA)

【規格】

96T×2/盒

【預期用途】

本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬口蹄疫病毒亞洲I型抗體。可用于評估感染豬的血清學診斷以及豬群豬口蹄疫疫苗免疫狀況分析。

【檢驗原理】

本試劑盒應用固相酶聯免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有豬口蹄疫病毒亞洲I型VP1結構蛋白的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的FMDV-VP1-Ab結合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+FMDV-VP1-Ab+酶標抗豬IgG抗體”復合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與FMDV-VP1-Ab的量成正比，當樣本反應顯色后，經酶標儀檢測所得結果超過設定的臨界值時結果判為陽性，即表明免疫產生了抗體或有自然感染存在。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標儀（雙波長450/630nm濾光片）

2．微量移液器（單道1-100μl、0.5-10μl、多道30-300μl）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．一次性槍頭（10μl，200μl）

6．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存應不超過一周，長期應在-20℃以下保存。

2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的血清樣本。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡: 試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min。酶標板應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（例：將5μl樣本加至195μl樣本稀釋液中）。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（例：將50ml洗滌液加入950ml去離子水中）。若20倍濃縮洗滌液出現結晶，屬正常現象，放置37℃至溶解后即可。

【檢驗方法】

1．加樣：根據樣本數量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應孔中（可不設空白對照）。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本。

2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

3．洗板：甩去孔內液體，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10s，直接甩出，洗滌3次，后一次洗滌后吸干板內液體。

4．加酶：每孔加酶標記物100μl。

5．溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數。

9．讀數：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結果判定】

在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.1。

當樣品OD值≥0.4判為抗體陽性；樣品OD值＜0.4判為抗體陰性。

   若進行大量樣本檢測時，可使用試劑盒專業分析軟件進行分析數據結果，該軟件可登陸本公司*網站下載。

【注意事項】

1．本試劑盒僅用供研究使用。

2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不用批次的組分混合使用。

3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書。

4．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30min，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30min后廢棄。

5．未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。

6．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經常校對其準確性。

7．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。

【儲存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個月。

【生產日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

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